Clorochina 145

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Clorochina Migliora il numero di IL-10 cellule che producono e l'espressione di B7-2 e ICAM-1 in A Vitro - coltivate PBMC Come citare Hugosson, E. Bj408. doi: Informazioni 10,1046 / j.1365-3083.2002.01051.x Autore Il Dipartimento di Immunologia, Università di Stoccolma e il Dipartimento di Malattie Infettive, Karolinska Hospital, Karolinska Institutet, Stoccolma, Svezia Dr. E. Hugosson, Università di Stoccolma, Arrhenius Laboratori per Natural Scienze, Dipartimento di Immunologia, S-106 91 Stockholm, Sweden. E-mail: ehugossonhotmail. com pubblicazione Storia Edizione on-line: 25 APR 2002 Version of Record on-line il 25 aprile 2002 (Ricevuto 14 agosto 2001 accettate in forma riveduta 15 novembre 2001) Articolo strumenti astratta Clorochina è prescritto sia come un anti-malarica e una farmaco anti-infiammatorio. Tuttavia, i suoi effetti immuno-modulante rimangono in gran parte poco chiari. Studi precedenti hanno dimostrato che la clorochina inibisce la proliferazione antigene-indotta, che implica effetti immuno-soppressiva. In questo studio, abbiamo esaminato se l'inibizione della proliferazione riflette i cambiamenti nelle molecole di superficie che sono importanti per l'attivazione delle cellule T e se clorochina colpisce l'equilibrio tra citochine pro e anti-infiammatori. Clorochina elevata espressione delle molecole di costimolazione e adesione B7-2 (CD86) e ICAM-1 (CD54) in cellule mononucleate periferiche (PBMC). è stato inoltre osservato un aumento della percentuale di cellule CD14, e all'interno di questa popolazione cellulare, un aumento ICAM-1 è stato rivelato da esperimenti doppia colorazione. Valutazione delle frequenze di interleuchina (IL) -10 e interferone (IFN) - produrre cellule in vitro - PBMC coltivate hanno dimostrato che il rapporto tra pro e citochine antinfiammatorie cambiato dopo l'esposizione alla clorochina, favorendo risposte immunitarie anti-infiammatori . Questo effetto era principalmente a causa dell'aumento delle frequenze di IL-10-cellule che producono ed è stato visto con o senza la presenza di stimolare antigeni o mitogeni. I nostri risultati indicano che la clorochina influenza la direzione della stimolazione linfocitaria verso una risposta anti-infiammatoria incidendo sulle cellule presentanti l'antigene (APC) e l'equilibrio tra citochine pro ed anti-infiammatorie, piuttosto che generalmente inibizione della produzione di citochine. Introduzione clorochina è ancora il più comunemente usato farmaci antimalarici in Africa tropicale, nonostante la diffusa resistenza di Plasmodium falciparum parassiti al farmaco. La clorochina ha un effetto tossico diretto ben studiato su parassiti della malaria, mentre i suoi effetti anti-infiammatori, utilizzati nel trattamento delle malattie reumatiche 1, non sono stati ancora chiaramente chiariti. Inoltre, è ancora da definire la rilevanza clinica degli effetti anti-infiammatori di clorochina infezione della malaria. I medici che lavorano in aree di resistenza clorochina hanno osservato che la risposta clinica dopo trattamento con sulphadoxine-pirimetamina (Fansidar) può mostrare completa efficacia anti-parassita, ma è meno efficiente nel abrogazione dei sintomi clinici rispetto a clorochina 2. Queste osservazioni suggeriscono che la clorochina può avere effetti benefici, diversi da quelli anti-parassitari. Elevati livelli di citochine pro-infiammatorie sono importanti nella patogenesi di entrambi artrite reumatoide 3 e malaria 4, 5. In particolare, alti livelli di fattore di necrosi tumorale (TNF) -16. La clorochina riduce anche le risposte proliferative di antigene e mitogeno, eventualmente spiega con alterata processazione dell'antigene 17, 18 e IL-2 19. In contrasto con questi effetti soppressivi, clorochina stimola altre funzioni delle cellule endoteliali, come la generazione della proteasi cellulare e la migrazione delle cellule 20. Sebbene questi in vitro ed in vivo suggeriscono un effetto inibitorio preferenzialmente della clorochina sul sistema immunitario, il meccanismo preciso (s), per cui clorochina esercita i suoi effetti anti-infiammatori sono ancora da determinare. Oggi è ben stabilito che l'equilibrio tra funzionalmente distinte cellule T citochine produzione del fenotipo CD4 o CD8, denotato (/ Tc2 Th2) cellule T helper o T citotossiche di tipo 1 (Th1 / Tc1) e di tipo 2, determina se un individuo soccombere alla malattia o no 21. Questi tipi di cellule si distinguono per la loro capacità di regolare le risposte pro-infiammatorie e anti-infiammatorie. In risposta pro-infiammatorie, IFN-27. Il profilo di produzione di citochine di cellule T è in parte regolata a livello delle molecole di costimolazione B7-1 e B7-2 28. Nonostante l'importanza di equilibri tra Th1 / Tc1 e le risposte delle cellule Th2 / Tc2, la questione critica di come questo equilibrio è regolato è in gran parte irrisolto. Le differenze tra l'elaborazione e presentazione dell'antigene, tipi di cellule presentanti l'antigene (APC) e citochine prodotte in una fase precoce della risposta immunitaria sono probabilmente importanti. Altri fattori implicati nel presente regolamento sono il tipo e la dose di antigene nonché fattori genetici 21. In questo studio abbiamo voluto chiarire se clorochina esercita i suoi effetti sui fattori chiave che regolano l'equilibrio tra le risposte immunitarie pro-infiammatorie e anti-infiammatorie. Materiali e metodi Reagenti clorochina fosfato è stato gentilmente fornito da da, Svezia), CD54-PE (serotec, Oxford, UK) e CD45-FITC / CD14-PE (Becton Dickinson). Preparazione e frazionamento delle cellule mononucleate del sangue periferico venoso dagli adulti svedesi sani è stato redatto in vacutainer eparinizzate (Becton Dickinson, Meyland, Francia). cellule mononucleate periferiche (PBMC) sono stati isolati da Ficoll-Pacque (Amersham, Pharmacia Biotech AB, Uppsala, Svezia) centrifugazione in gradiente. PBMC sono stati lavati, conteggiati nel trypan blue e sospeso in terreni di coltura tissutale (TCM RPMI-Hepes Gibco, Paisley, UK) integrato con gentamicina (25 tunaholm, Svezia) come descritto altrove 29. Tutte le colture cellulari sono state eseguite in TCM e incubate in atmosfera umida contenente il 5 CO 2. sospensioni proliferazione test cellulare, comprensivi di 10 monociti e 90 cellule T (in precedenza dimostrato di essere le concentrazioni ottimali per l'antigene e mitogeno pecifici attivazione delle cellule T 30) sono state seminate in triplicato in piastre da 96 pozzetti da microtitolazione a fondo piatto (Nunclon) a 200 000 cellule / pozzetto. Clorochina a varie concentrazioni è stato aggiunto alle colture il giorno 0, così come-IL-10 anticorpi anti nell'esperimento blocco. L'antigene o mitogeno appropriata è stata integrata 16Ci / ben 3 H-timidina (Amersham, Solna, Svezia) al giorno 3, incubato per un ulteriore 16 ore e raccolte (Tomtec, Wallach, Sollentuna, Svezia). La proliferazione è stato determinato da 3 incorporazione H-timidina, come rilevato da scintillazione liquida (Microbeta, Wallac) e definito come media cpm di triplicati. valori di EC50 sono stati determinati leggendo le concentrazioni correlano alla proliferazione half-max in curve doseresponse: I rapporti mediani tra proliferazione in culture con o senza l'aggiunta di monociti sono stati calcolati secondo la seguente formula: